TGF beta Receptor 2/TGFBR2 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-400144-LAC

TGFBR2 codifica il recettore 2 del transforming growth factor beta (TGF-βR2), una chinasi transmembrana serina/treonina che avvia la segnalazione canonica del TGF-β fosforilando TGFBR1 e attivando SMAD2/3, al fine di regolare programmi trascrizionali che controllano proliferazione, differenziamento, rimodellamento della matrice extracellulare e modulazione immunitaria. Attraverso il cross-talk con le vie MAPK, PI3K/AKT e delle GTPasi di tipo Rho, TGF-βR2 contribuisce a coordinare la transizione epitelio-mesenchimale, l’arresto del ciclo cellulare e l’omeostasi tissutale. Alterazioni dell’espressione o della segnalazione di TGFBR2 perturbano la risposta alle citochine e le interazioni stroma–epitelio, e sono spesso implicate in stati infiammatori deregolati e nella biologia tumorale, incluse modifiche del controllo della crescita e fenotipi associati all’invasione. In quanto nodo centrale nella segnalazione recettoriale ligando-dipendente, TGFBR2 è comunemente studiato per ricostruire l’architettura delle vie di segnalazione, le risposte trascrizionali e il rimodellamento del microambiente cellulare in modo dipendente dal contesto.

Le particelle di attivazione lentivirale TGF beta Receptor 2/TGFBR2 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di TGFBR2 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale TGF beta Receptor 2/TGFBR2 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione TGFBR2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di TGF beta Receptor 2/TGFBR2. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo TGFBR2 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.