Tenascin-R Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402968-ACT

TNR codifica la Tenascina-R, una glicoproteina della matrice extracellulare arricchita nel sistema nervoso centrale che modula le interazioni cellula–cellula e cellula–matrice durante lo sviluppo neurale e l’organizzazione sinaptica nell’adulto. La Tenascina-R contribuisce alla guida assonale, alla crescita dei neuriti, alla mielinizzazione e all’architettura delle reti perineuronali coordinando adesione e segnalazione con proteoglicani e altri componenti della matrice. Attraverso queste funzioni influenza la plasticità neuronale, la maturazione dei circuiti inibitori e la comunicazione glia–neuroni, processi spesso studiati nella biologia delle malattie neuroevolutive e neurodegenerative. Alterazioni del rimodellamento della matrice extracellulare e delle dinamiche delle reti perineuronali legate alla disregolazione di TNR sono rilevanti per la ricerca su epilessia, disturbi psichiatrici e plasticità associata a lesioni, senza implicare esiti clinici.

Tenascin-R Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di TNR senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Tenascin-R Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus TNR nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione TNR, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Tenascin-R. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus TNR nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Tenascin-R nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Tenascin-R nelle cellule tumorali con espressione di TNR silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.