TEF-5 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403417-ACT

Il gene umano **TEAD3** codifica il fattore di trascrizione **TEF-5**, una proteina legante il DNA con dominio **TEA/ATTS** che si associa ai co-attivatori **YAP/TAZ** per regolare programmi genici che controllano proliferazione, specificazione di linea cellulare e crescita tissutale. TEF-5 opera all’interno della rete di segnalazione **Hippo**, integrando segnali meccanici e contatto cellula-cellula per modulare output trascrizionali quali il rimodellamento della matrice extracellulare e la progressione del ciclo cellulare. Un’attività trascrizionale **TEAD–YAP/TAZ** deregolata è stata collegata a fenotipi oncogenici, vie associate alla fibrosi e programmi di sviluppo alterati, rendendo **TEAD3** un bersaglio utile per studi meccanicistici sul controllo trascrizionale. L’espressione e l’attività di TEAD3 sono quindi rilevanti per analizzare una regolazione genica dipendente dal contesto in biologia del cancro, sviluppo degli organi e transizioni di stato cellulare.

TEF-5 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di TEAD3 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

TEF-5 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus TEAD3 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione TEAD3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di TEF-5. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus TEAD3 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da TEF-5 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via TEF-5 nelle cellule tumorali con espressione di TEAD3 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.