TdT Plasmide Double Nickase (h): sc-406822-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- TdT Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il TdT Double Nickase Plasmid (h) e il TdT Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira DNTT. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: TdT Antibody (C-11): sc-393710
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
TdT Plasmide Double Nickase (h) | sc-406822-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
TdT Plasmide Double Nickase (h2) | sc-406822-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
La DNA nucleotidilexotransferasi (DNTT) codifica la deossinucleotidil transferasi terminale (TdT), una DNA polimerasi specializzata che aggiunge nucleotidi non stampo-dipendenti alle estremità del DNA durante la ricombinazione V(D)J. L’attività di TdT aumenta la diversità giunzionale nei geni delle immunoglobuline e del recettore dei linfociti T, collegandola alla riparazione programmata delle rotture a doppio filamento e alla processazione delle estremità nell’ambito della giunzione di estremità non omologhe (NHEJ). L’espressione è in gran parte limitata ai linfociti in sviluppo, rendendo DNTT un determinante chiave della formazione del repertorio immunitario adattativo. L’espressione disregolata di TdT è ampiamente utilizzata come marcatore molecolare di stati linfoidi immaturi ed è rilevante per gli studi sulla biologia delle neoplasie linfoidi e sulla riparazione aberrante del DNA.
TdT Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus DNTT nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di DNTT. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di DNTT. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con DNTT interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.