TCL-1A Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402028-ACT

TCL1A codifica a proteína humana de leucemia/linfoma de células T 1A (TCL-1A), um regulador citoplasmático da sinalização por quinases que pode potencializar a atividade da via PI3K–AKT por meio de interações proteína–proteína. A TCL-1A é expressa de forma mais proeminente em compartimentos linfoides precoces e contribui para o desenvolvimento, a sobrevivência e os programas de sinalização metabólica dos linfócitos. A expressão desregulada de TCL1A tem sido associada à proliferação aberrante de células B e T e é frequentemente estudada no contexto de neoplasias hematológicas, nas quais alterações no controle transcricional e apoptótico dependente de AKT podem impactar fenótipos oncogênicos. Como um modulador relevante de vias, TCL1A é comumente investigado para mapear reguladores a montante e efetores a jusante da sinalização de AKT em células imunes.

TCL-1A O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TCL1A sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TCL-1A O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TCL1A em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TCL1A, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TCL-1A. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TCL1A nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TCL-1A no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TCL-1A em células tumorais com expressão de TCL1A silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.