TCL-1A Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402028-ACT

TCL1A codifica la proteina umana T-cell leukemia/lymphoma 1A (TCL-1A), un regolatore citoplasmatico della segnalazione chinasi che può potenziare l’attività della via PI3K–AKT tramite interazioni proteina–proteina. TCL-1A è espressa in modo particolarmente marcato nei compartimenti linfoidi precoci e contribuisce allo sviluppo, alla sopravvivenza e ai programmi di segnalazione metabolica dei linfociti. Un’espressione deregolata di TCL1A è stata associata a una proliferazione aberrante di cellule B e T ed è spesso studiata nel contesto delle neoplasie ematologiche, dove un’alterazione del controllo trascrizionale e apoptotico dipendente da AKT può influenzare fenotipi oncogeni. In quanto modulatore rilevante per la via, TCL1A viene comunemente analizzato per mappare i regolatori a monte e gli effettori a valle della segnalazione di AKT nelle cellule immunitarie.

TCL-1A Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di TCL1A senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

TCL-1A Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus TCL1A nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione TCL1A, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di TCL-1A. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus TCL1A nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da TCL-1A nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via TCL-1A nelle cellule tumorali con espressione di TCL1A silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.