TCF7L2/TCF4 Plasmide Double Nickase (h): sc-400607-NIC

TCF7L2 (noto anche come TCF4) codifica un fattore di trascrizione con dominio HMG (high-mobility group) box che agisce come principale effettore nucleare della segnalazione canonica Wnt/β-catenina. In partnership con la β-catenina e co-regolatori, TCF7L2 modula programmi trascrizionali che controllano le decisioni di destino cellulare, la proliferazione e la differenziazione in molteplici contesti tissutali, inclusi l’epitelio intestinale e il pancreas endocrino. La regolazione dipendente da TCF7L2 influenza l’accessibilità della cromatina e integra segnali provenienti da vie di sviluppo e metaboliche per plasmare un’espressione genica specifica del contesto. Le varianti genetiche e l’attività disregolata di TCF7L2 sono state collegate a tratti metabolici e al rischio di diabete di tipo 2, e l’output trascrizionale anomalo di Wnt/TCF è frequentemente studiato nella biologia del cancro e delle cellule staminali.

TCF7L2/TCF4 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus TCF7L2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di TCF7L2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di TCF7L2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con TCF7L2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.