Synaptopodin Plasmide Double Nickase (h): sc-400486-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Synaptopodin Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Synaptopodin Double Nickase Plasmid (h) e il Synaptopodin Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira SYNPO. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Synaptopodin Antibody (D-9): sc-515842
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Synaptopodin Plasmide Double Nickase (h) | sc-400486-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Synaptopodin Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400486-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SYNPO codifica per la sinaptopodina, una proteina associata all’actina che organizza il citoscheletro in compartimenti cellulari specializzati, tra cui le spine dendritiche dei neuroni e i pedicelli dei podociti renali. La sinaptopodina modula la dinamica dei filamenti di actina coordinando la segnalazione delle GTPasi della famiglia Rho e complessi regolatori dell’actina, influenzando così forma cellulare, adesione e motilità. Nei neuroni contribuisce alla maturazione delle spine e alla plasticità sinaptica, mentre nei podociti sostiene l’integrità del diaframma a fessura e l’omeostasi della barriera di filtrazione. Alterazioni dell’espressione o della funzione di SYNPO sono state associate a instabilità del citoscheletro e sono studiate nel contesto delle nefropatie proteinuriche e della disfunzione sinaptica legata alla neurodegenerazione.
Synaptopodin Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus SYNPO nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di SYNPO. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di SYNPO. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con SYNPO interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.