Synaptogyrin-3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423240

Panoramica

Syngr3 codifica la sinaptogirina-3, una proteina di membrana delle vescicole sinaptiche a quattro domini transmembrana, arricchita nelle terminazioni presinaptiche, che contribuisce al traffico vescicolare e alla dinamica del rilascio dei neurotrasmettitori. La sinaptogirina-3 partecipa ai processi di esocitosi regolata e di riciclo endocitico che modellano la trasmissione sinaptica e la plasticità, interfacciandosi con i principali componenti del macchinario di ciclo delle vescicole sinaptiche. Alterazioni della funzione della famiglia delle sinaptogirine sono state associate a perturbazioni dell’attività delle reti neuronali e dell’omeostasi sinaptica, rendendo Syngr3 rilevante per studi sui meccanismi neuroevolutivi e neurodegenerativi. Nei modelli murini, la perturbazione di Syngr3 è utile per analizzare il contributo presinaptico a fenotipi a livello di circuito e alla segnalazione dipendente dall’attività.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Synaptogyrin-3 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Syngr3 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Syngr3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Syngr3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Synaptogyrin-3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Syngr3 per lo studio della segnalazione di Synaptogyrin-3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Syngr3 critici per la funzione di Synaptogyrin-3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Syngr3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Synaptogyrin-3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Synaptogyrin-3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Syngr3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Synaptogyrin-3 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Synaptogyrin-3 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Syngr3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Syngr3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.