Syk Plasmide Double Nickase (h): sc-400189-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Syk Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Syk Double Nickase Plasmid (h) e il Syk Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira SYK. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Syk Antibody (4D10): sc-1240
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Syk Plasmide Double Nickase (h) | sc-400189-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Syk Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400189-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SYK codifica per Syk, una tirosin-chinasi citosolica non recettoriale che collega la segnalazione degli immunorecettori alle vie effettrici a valle nelle cellule ematopoietiche. In seguito all’attivazione di recettori contenenti ITAM, come il recettore delle cellule B e i recettori Fc, Syk fosforila proteine adattatrici ed enzimi, propagando il segnale attraverso PLCγ, PI3K–AKT, MAPK/ERK e NF-κB e modulando i flussi di calcio, i programmi trascrizionali, la proliferazione e le risposte citochiniche. Oltre all’attivazione immunitaria, Syk contribuisce alla fagocitosi mediata da FcR, a contesti di segnalazione legati all’inflammasoma e al rimodellamento del citoscheletro tramite vie associate alle integrine. Una segnalazione di SYK deregolata è stata implicata in un’attivazione aberrante delle cellule B e in circuiti infiammatori, rendendolo un obiettivo frequente negli studi sulle reti di segnalazione immunitaria e sui meccanismi delle malattie ematologiche.
Syk Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus SYK nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di SYK. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di SYK. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con SYK interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.