SV2A Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-425665-LAC

Sv2a codifica la glicoproteina delle vescicole sinaptiche 2A (SV2A), un’abbondante proteina di membrana delle vescicole secretorie che supporta il rilascio di neurotrasmettitori dipendente da Ca2+ e il ciclo delle vescicole presinaptiche. SV2A influenza il priming e l’esocitosi delle vescicole regolando il traffico delle proteine vescicolari e interagendo con componenti del macchinario di rilascio, contribuendo così a plasmare la trasmissione sinaptica e l’eccitabilità delle reti neurali. Nel sistema nervoso del topo, l’espressione di SV2A è spesso utilizzata come indicatore indiretto della densità e della maturazione sinaptica, ed è implicata nel rimodellamento sinaptico dipendente dall’attività. Alterazioni dei livelli o della funzione di SV2A sono state associate a disfunzioni neurofisiologiche e a fenotipi correlati alle crisi epilettiche, rendendo Sv2a un bersaglio utile per studi meccanicistici sulla segnalazione neuronale e sul neurosviluppo.

Le particelle di attivazione lentivirale SV2A (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Sv2a in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale SV2A (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Sv2a, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di SV2A. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Sv2a e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.