SUR-2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423218

Panoramica

Abcc9 codifica il recettore della sulfonilurea 2 (SUR-2), una subunità regolatoria dei canali del potassio sensibili all’ATP (KATP) che collega lo stato metabolico cellulare all’eccitabilità di membrana controllando il gating dei canali Kir6.x. Nel topo, i canali KATP contenenti SUR-2 sono particolarmente presenti nel muscolo cardiaco e nel muscolo liscio vascolare, dove modulano la durata del potenziale d’azione, la gestione del calcio e il tono vascolare in risposta a variazioni del rapporto ATP/ADP e della segnalazione mediata dai fosfolipidi. Attraverso questi ruoli, ABCC9 integra segnali bioenergetici con vie di adattamento allo stress quali il precondizionamento ischemico, i programmi di contrattilità del muscolo liscio e la funzione mitocondriale. La disregolazione dell’attività di ABCC9/dei canali KATP è stata associata a fenotipi cardiovascolari e metabolici, e varianti umane di ABCC9 sono collegate a sindromi da canalopatia che interessano cuore e vasi, rendendo Abcc9 un bersaglio rilevante per la modellizzazione meccanicistica delle malattie.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO SUR-2 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Abcc9 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Abcc9 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Abcc9 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina SUR-2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Abcc9 per lo studio della segnalazione di SUR-2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Abcc9 critici per la funzione di SUR-2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Abcc9 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal SUR-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal SUR-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Abcc9. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal SUR-2 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR SUR-2 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Abcc9 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Abcc9 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.