SUR-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-423217-ACT

O gene Abcc8 do camundongo codifica o receptor de sulfonilureia 1 (SUR-1), a subunidade reguladora dos canais de potássio sensíveis ao ATP (KATP), que acoplam o estado energético celular à excitabilidade da membrana. Nas células β pancreáticas, o SUR-1 se associa ao KIR6.2 para ajustar a abertura do canal em resposta às razões ATP/ADP, moldando o influxo de cálcio dependente de despolarização e o acoplamento estímulo–secreção. Esse eixo de sensoriamento metabólico também contribui para a excitabilidade em neurônios e outros tecidos secretores, conectando a função de ABCC8/SUR-1 a vias que controlam a liberação de insulina e as respostas celulares ao estresse. Alterações genéticas e funcionais na regulação dos canais KATP são amplamente estudadas por sua relevância em distúrbios da homeostase da glicose e em fenótipos endócrinos e metabólicos relacionados.

SUR-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Abcc8 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SUR-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Abcc8 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Abcc8, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SUR-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Abcc8 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SUR-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SUR-1 em células tumorais com expressão de Abcc8 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.