SUMO-3 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-423045-ACT

Mouse Sumo3 codifica SUMO-3, un modificatore simile all’ubiquitina che viene coniugato covalentemente ai residui di lisina delle proteine bersaglio per regolarne stabilità, localizzazione e attività. La SUMOilazione coordina il controllo dinamico della trascrizione, della riparazione dei danni al DNA, dell’organizzazione della cromatina e della progressione del ciclo cellulare attraverso la rete di enzimi E1 (SAE1/SAE2), E2 (UBC9) ed E3 ligasi, ed è reversibile grazie alle proteasi SENP. SUMO-3 partecipa alla segnalazione responsiva allo stress e alla proteostasi modulando l’assemblaggio dei corpi nucleari e le reti di interazione proteina–proteina. Una coniugazione di SUMO deregolata è stata collegata in letteratura ad alterazioni della segnalazione infiammatoria, a stress proteotossico associato a neurodegenerazione e a programmi trascrizionali oncogenici, a supporto del suo impiego in studi meccanicistici di biologia delle malattie.

SUMO-3 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Sumo3 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

SUMO-3 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Sumo3 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Sumo3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di SUMO-3. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Sumo3 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da SUMO-3 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via SUMO-3 nelle cellule tumorali con espressione di Sumo3 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.