Plásmido CRISPR de Activación (m) SUMO-3: sc-423045-ACT

El gen murino **Sumo3** codifica **SUMO-3**, un modificador similar a la ubiquitina que se conjuga de forma covalente a residuos de lisina en proteínas diana para regular su estabilidad, localización y actividad. La **SUMOilación** coordina el control dinámico de la transcripción, la reparación del daño en el ADN, la organización de la cromatina y la progresión del ciclo celular mediante la red de E1 (SAE1/SAE2), E2 (UBC9) y ligasas E3, y se revierte por proteasas SENP. SUMO-3 participa en la señalización sensible al estrés y en la proteostasis al modular el ensamblaje de cuerpos nucleares y las redes de interacciones proteína–proteína. La conjugación anómala de SUMO se ha vinculado en la literatura con alteraciones de la señalización inflamatoria, estrés proteotóxico asociado a neurodegeneración y programas transcripcionales oncogénicos, lo que respalda su uso en estudios mecanísticos de biología de enfermedades.

SUMO-3 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Sumo3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

SUMO-3 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Sumo3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Sumo3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de SUMO-3. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Sumo3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de SUMO-3 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía SUMO-3 en células tumorales con expresión de Sumo3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.