Sulf-2 Plasmide Double Nickase (m2): sc-428206-NIC-2

Il gene murino Sulf2 codifica l’endosolfatasi extracellulare dell’eparan solfato 6-O 2 (Sulf-2), un enzima secreto che rimodella l’eparan solfato presente sulla superficie cellulare e nella matrice rimuovendo i gruppi 6-O-solfato e modulando così la disponibilità dei ligandi e le interazioni con i recettori. Attraverso la modifica dei pattern di solfatazione dell’eparan solfato, Sulf-2 influenza assi di segnalazione chiave, tra cui FGF, WNT, Hedgehog, BMP e i gradienti di chemochine, plasmando processi quali migrazione cellulare, patterning tissutale, angiogenesi e risposte infiammatorie. Un’attività deregolata di SULF2 è stata associata ad alterazioni della dinamica della matrice extracellulare e a segnalazione aberrante in contesti come la biologia tumorale, la fibrosi e fenotipi neuroevolutivi, rendendo Sulf2 un bersaglio utile per studi meccanicistici della segnalazione dipendente dai glicosaminoglicani. L’editing genetico di Sulf2 in modelli murini consente la dissezione funzionale della modulazione delle vie dipendente dalla solfatazione, della regolazione della nicchia extracellulare e delle interazioni microambientali rilevanti per la malattia, sia in vitro sia in vivo.

Sulf-2 Il plasmide Double Nickase (m2) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Sulf2 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Sulf2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Sulf2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Sulf2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.