Stat5b Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400878-ACT

STAT5B umano codifica Stat5b, un fattore di trascrizione dipendente dal segnale attivato a valle dei recettori per citochine e fattori di crescita tramite le chinasi JAK, con dimerizzazione e traslocazione nucleare guidate dalla fosforilazione. Stat5b regola programmi trascrizionali che controllano lo sviluppo dei linfociti, l’omeostasi immunitaria e la crescita somatica, integrando input da vie tra cui la JAK–STAT e il cross-talk con la segnalazione MAPK e PI3K. Un’attività di STAT5B deregolata è associata a una risposta alterata alle citochine e a transizioni anomale dello stato cellulare rilevanti per i disturbi immunologici e per la biologia delle neoplasie ematologiche. In quanto hub trascrizionale, STAT5B è ampiamente studiato per i suoi effetti su proliferazione, differenziamento, sopravvivenza ed espressione genica specifica di linea.

Stat5b Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di STAT5B senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Stat5b Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus STAT5B nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione STAT5B, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Stat5b. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus STAT5B nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Stat5b nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Stat5b nelle cellule tumorali con espressione di STAT5B silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.