Stat5a Plasmide Double Nickase (h): sc-400150-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Stat5a Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Stat5a Double Nickase Plasmid (h) e il Stat5a Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira STAT5A. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Stat5a Antibody (C-6): sc-271542
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Stat5a Plasmide Double Nickase (h) | sc-400150-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Stat5a Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400150-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
STAT5A codifica Stat5a, un fattore di trascrizione attivato dalle citochine che viene fosforilato a valle delle chinasi JAK in seguito alla stimolazione dei recettori per interleuchine, ormone della crescita, prolattina e altri segnali ematopoietici. Una volta attivata, Stat5a dimerizza, trasloca nel nucleo e regola programmi genici che controllano proliferazione, sopravvivenza, differenziamento e omeostasi delle cellule immunitarie, integrando il crosstalk con le vie di segnalazione PI3K–AKT e MAPK. L’attività di STAT5A è spesso studiata in contesti di segnalazione citochinica deregolata e di controllo trascrizionale alterato nelle neoplasie ematologiche e in modelli di malattie immuno-mediate. La perturbazione di STAT5A consente l’analisi meccanicistica della specificazione di linea, della dipendenza dalle citochine e del rimodellamento delle reti trascrizionali nelle cellule umane.
Stat5a Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus STAT5A nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di STAT5A. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di STAT5A. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con STAT5A interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.