ST2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402390-ACT

IL1RL1 umano codifica ST2, un membro della famiglia dei recettori dell’interleuchina-1 che funge da recettore di segnalazione per l’IL-33 e partecipa alla regolazione dell’immunità innata e adattativa. L’attivazione di ST2 coinvolge vie dipendenti da MyD88 che portano alla segnalazione tramite NF-κB e MAPK, modulando la produzione di citochine, il reclutamento cellulare e le risposte di rimodellamento tissutale. L’asse IL-33/ST2 è implicato nell’infiammazione di tipo 2 e nell’omeostasi immunitaria, con rilevanza per l’infiammazione delle vie aeree, la biologia delle malattie allergiche e i contesti di infiammazione cardiovascolare. Una segnalazione di ST2 deregolata è stata inoltre studiata in condizioni infiammatorie croniche in cui il dialogo tra cellule epiteliali e immunitarie influenza programmi trascrizionali associati alla malattia.

ST2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di IL1RL1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

ST2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus IL1RL1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione IL1RL1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di ST2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus IL1RL1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da ST2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via ST2 nelle cellule tumorali con espressione di IL1RL1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.