SSH1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-433087

Panoramica

La fosfatasi proteica Slingshot 1 (SSH1) è una fosfatasi della cofilina che regola il turnover dei filamenti di actina defosforilando e attivando ADF/cofilina, promuovendo così il taglio di F-actina e il rimodellamento del citoscheletro. Nelle cellule murine, SSH1 integra segnali provenienti dalle GTPasi della famiglia Rho e da chinasi come LIMK per controllare la dinamica dei lamellipodi, la polarità cellulare, l’adesione e la migrazione direzionale. Questo asse di regolazione dell’actina influenza endocitosi, crescita dei neuriti e meccanotrasduzione, collegando l’attività di SSH1 a processi rilevanti per lo sviluppo, il traffico delle cellule immunitarie e il rimodellamento tissutale. La disregolazione della segnalazione cofilina–LIMK–SSH è stata associata a comportamenti invasivi alterati e a risposte allo stress in molteplici contesti rilevanti per la patologia, rendendo Ssh1 un bersaglio utile per l’analisi delle vie di segnalazione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO SSH1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Ssh1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Ssh1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Ssh1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina SSH1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Ssh1 per lo studio della segnalazione di SSH1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Ssh1 critici per la funzione di SSH1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Ssh1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal SSH1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal SSH1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Ssh1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal SSH1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR SSH1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Ssh1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Ssh1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.