SRPK1 Plasmide Double Nickase (h): sc-402855-NIC

SRPK1 codifica la chinasi 1 specifica per proteine ricche in serina/arginina (serine/arginine-rich protein-specific kinase 1), un regolatore conservato dello splicing del pre-mRNA che fosforila i fattori di splicing SR per controllarne localizzazione e attività. Attraverso la modulazione della scelta dei siti di splicing e dell’inclusione degli esoni, SRPK1 influenza programmi di espressione genica legati alla progressione del ciclo cellulare, alle risposte allo stress e agli output di segnalazione che dipendono dallo splicing alternativo. L’attività di SRPK1 si interfaccia con vie di processamento dell’RNA dipendenti dalla fosforilazione e può rimodellare i repertori di isoforme trascrittomiche, con effetti su apoptosi, proliferazione e dinamica del citoscheletro. La deregolazione del controllo dello splicing mediato da SRPK1 è stata associata a fenotipi rilevanti per la malattia in ambito oncologico, nella neurodegenerazione e nei meccanismi legati all’angiogenesi, supportandone l’impiego come bersaglio per studi meccanicistici della regolazione dipendente dallo splicing.

SRPK1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus SRPK1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di SRPK1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di SRPK1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con SRPK1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.