SREBP-2 Plasmide Double Nickase (h): sc-400575-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- SREBP-2 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il SREBP-2 Double Nickase Plasmid (h) e il SREBP-2 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira SREBF2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: SREBP-2 Antibody (1C6): sc-13552
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
SREBP-2 Plasmide Double Nickase (h) | sc-400575-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
SREBP-2 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400575-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SREBF2 codifica la sterol regulatory element-binding protein 2 (SREBP-2), un fattore di trascrizione ancorato alla membrana che viene attivato tramite proteolisi intramembrana regolata in risposta a bassi livelli di steroli intracellulari. La SREBP-2 nucleare induce l’espressione dei geni coinvolti nella biosintesi e nell’assorbimento del colesterolo, inclusi enzimi chiave della via del mevalonato e il recettore delle LDL, coordinando così l’omeostasi lipidica e la biogenesi di membrana. La sua attività è integrata con il traffico dal reticolo endoplasmatico (RE) all’apparato di Golgi e con il sensing degli steroli mediato da SCAP/INSIG, collegando lo stato metabolico al controllo trascrizionale. Una segnalazione di SREBP-2 deregolata è stata associata ad alterazioni del metabolismo del colesterolo nei disturbi cardiometabolici, nella steatosi epatica e nel rimodellamento lipidico dipendente dai lipidi in oncologia.
SREBP-2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus SREBF2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di SREBF2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di SREBF2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con SREBF2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.