Sox-7 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402935-ACT

SOX7 codifica il fattore di trascrizione Sox-7, una proteina legante il DNA con dominio HMG-box che regola la specificazione di linea cellulare e la morfogenesi dei tessuti, con ruoli di primo piano nello sviluppo vascolare ed endodermico. Sox-7 modula programmi di espressione genica legati alla segnalazione Wnt/β-catenina, all’impegno del destino cellulare e alla differenziazione endoteliale, influenzando la proliferazione e le interazioni cellula–cellula. Un’alterata espressione di SOX7 è stata associata a reti trascrizionali dello sviluppo deregolate ed è stata studiata in contesti che includono fenotipi vascolari congeniti e la riprogrammazione trascrizionale correlata al cancro. In quanto regolatore a monte di molteplici geni bersaglio, SOX7 rappresenta uno strumento utile per esplorare il crosstalk tra vie di segnalazione e le gerarchie di fattori di trascrizione in modelli cellulari umani.

Sox-7 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SOX7 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Sox-7 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SOX7 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SOX7, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Sox-7. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SOX7 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Sox-7 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Sox-7 nelle cellule tumorali con espressione di SOX7 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.