SmcY Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h2): sc-403217-KO-2

Panoramica

KDM5D codifica la demetilasi della lisina SmcY, legata al cromosoma Y, un enzima con dominio JmjC che rimuove i segni H3K4me3/me2 per regolare i programmi trascrizionali e l’accessibilità della cromatina. Rimodellando la metilazione istonica associata ai promotori, SmcY contribuisce al controllo epigenetico delle transizioni di stato cellulare, dell’espressione genica ristretta alla linea cellulare e del coordinamento di processi basati sul DNA come la replicazione e la riparazione. Variazioni o deregolazione dell’attività della famiglia KDM5 sono state associate ad alterazioni dei fenotipi di differenziazione e proliferazione, e KDM5D è spesso studiato nel contesto della regolazione genica maschio-specifica e del contributo dei geni legati al cromosoma Y alla biologia delle malattie. Come modificatore epigenetico, SmcY rappresenta un punto d’accesso pratico per analizzare come le dinamiche di metilazione degli istoni influenzino gli output di segnalazione e la regolazione del genoma nelle cellule umane.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO SmcY (h2) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene KDM5D in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del KDM5D insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto KDM5D a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina SmcY.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di KDM5D per lo studio della segnalazione di SmcY, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni KDM5D critici per la funzione di SmcY
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di KDM5D per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal SmcY CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal SmcY CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus KDM5D. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal SmcY Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR SmcY (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia KDM5D per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio KDM5D definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.