SMCR7L Plasmide Double Nickase (h): sc-407077-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- SMCR7L Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il SMCR7L Double Nickase Plasmid (h) e il SMCR7L Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira MIEF1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: SMCR7L Antibody (A-6): sc-514135
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
SMCR7L Plasmide Double Nickase (h) | sc-407077-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
SMCR7L Plasmide Double Nickase (h2) | sc-407077-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
MIEF1 codifica SMCR7L (nota anche come MID51), una proteina della membrana mitocondriale esterna che funge da recettore per la GTPasi correlata alla dinamina DRP1 e contribuisce a coordinare la fissione mitocondriale con la distribuzione degli organelli. Modulando l’equilibrio tra fissione e fusione, SMCR7L influenza l’efficienza della fosforilazione ossidativa, il controllo di qualità mitocondriale e la suscettibilità a vie di risposta allo stress come la mitofagia e l’apoptosi. La disregolazione della dinamica mitocondriale è ampiamente implicata nella neurodegenerazione, nei disturbi cardiometabolici e nel rimodellamento metabolico associato al cancro, rendendo MIEF1 un bersaglio rilevante per studi meccanicistici dell’omeostasi mitocondriale.
SMCR7L Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus MIEF1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di MIEF1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di MIEF1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con MIEF1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.