SMCHD1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404142-ACT

SMCHD1 (structural maintenance of chromosomes flexible hinge domain containing 1) è un regolatore epigenetico che supporta interazioni della cromatina a lunga distanza e una repressione trascrizionale stabile in tutto il genoma. Nelle cellule umane, SMCHD1 contribuisce all’architettura della cromatina di ordine superiore, al mantenimento della metilazione del DNA in loci selezionati e al silenziamento degli elementi ripetitivi, intersecandosi con l’inattivazione del cromosoma X e con programmi più ampi di compattazione della cromatina. La sua attività influenza le reti di espressione genica che governano la differenziazione e la stabilità del genoma attraverso il rimodellamento della cromatina e processi associati all’eterocromatina. Un’alterazione della funzione di SMCHD1 è collegata a un controllo epigenetico deregolato in patologie quali la distrofia muscolare facioscapoloomerale di tipo 2 e la sindrome di Bosma con arinia e microftalmia, rendendolo un bersaglio chiave per studi meccanicistici della regolazione genica mediata dalla cromatina.

SMCHD1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SMCHD1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

SMCHD1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SMCHD1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SMCHD1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di SMCHD1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SMCHD1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da SMCHD1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via SMCHD1 nelle cellule tumorali con espressione di SMCHD1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.