SMC6 Plasmide Double Nickase (h): sc-402805-NIC

SMC6 codifica una proteina fondamentale della famiglia “structural maintenance of chromosomes” che, insieme a SMC5, forma il complesso SMC5/6, un regolatore chiave della stabilità del genoma. Questo complesso sostiene la replicazione e la riparazione del DNA coordinando la ricombinazione omologa, stabilizzando le forcelle di replicazione bloccate e favorendo la risoluzione degli intermedi del DNA che insorgono in condizioni di stress replicativo. SMC6 contribuisce inoltre alla segregazione dei cromosomi e al mantenimento dei telomeri, collegando la sua attività alla progressione del ciclo cellulare e alla preservazione dell’integrità cromosomica. L’alterazione o la deregolazione dei componenti della via SMC5/6 è associata a un aumento dell’instabilità genomica, un aspetto rilevante per gli studi sui difetti della risposta al danno del DNA e sui disturbi della manutenzione dei cromosomi.

SMC6 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus SMC6 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di SMC6. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di SMC6. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con SMC6 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.