Smad4 Plasmide Double Nickase (m): sc-421527-NIC

Smad4 del topo codifica un co-mediatore trascrizionale centrale della famiglia co-SMAD che integra i segnali di SMAD2/3 e SMAD1/5/8 attivati dal recettore per regolare l’espressione genica in modo dipendente dal contesto a valle delle vie TGF-β e BMP. In associazione con altri SMAD e cofattori di legame al DNA, SMAD4 controlla programmi coinvolti nel controllo del ciclo cellulare, nella differenziazione, nel rimodellamento della matrice extracellulare e nella modulazione immunitaria. L’alterazione della segnalazione di Smad4 riorganizza la plasticità epitelio-mesenchimale e l’omeostasi tissutale, rendendolo un tema ricorrente negli studi sul patterning dello sviluppo e sulle risposte trascrizionali associate alla fibrosi. In biologia del cancro, la funzione alterata di SMAD4 è ampiamente utilizzata come punto di accesso meccanicistico per esaminare, nei modelli murini, il passaggio della via TGF-β tra l’inibizione della crescita e output trascrizionali pro-invasivi.

Smad4 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Smad4 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Smad4. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Smad4. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Smad4 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.