Smad3 Plasmide Double Nickase (m): sc-421526-NIC

Smad3 nel topo codifica un fattore di trascrizione R-SMAD che trasduce i segnali dei recettori TGF-β/Activina dal citoplasma al nucleo per regolare programmi genici che controllano proliferazione, differenziamento, produzione di matrice extracellulare e modulazione immunitaria. In seguito alla fosforilazione mediata dal recettore, SMAD3 forma complessi con SMAD4 e coopera con cofattori specifici di linea cellulare per determinare l’accessibilità della cromatina e gli esiti trascrizionali. La segnalazione di SMAD3 interseca le vie MAPK, PI3K–AKT e NF-κB, contribuendo a un crosstalk dipendente dal contesto tra risposte infiammatorie e fibrotiche. Un’attività di SMAD3 deregolata è implicata nel rimodellamento patologico dei tessuti e nella fibrosi, nell’alterata omeostasi immunitaria e nella segnalazione del microambiente tumorale, rendendolo un nodo chiave per studi meccanicistici della biologia guidata da TGF-β.

Smad3 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Smad3 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Smad3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Smad3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Smad3 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.