SLIRP Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-418350

Panoramica

SLIRP (SRA stem-loop interacting RNA binding protein) è un piccolo fattore mitocondriale legante l’RNA che si associa a LRPPRC per stabilizzare e coordinare la gestione post-trascrizionale degli mRNA codificati dal mitocondrio. Sostenendo l’omeostasi dei trascritti mitocondriali, SLIRP contribuisce alla capacità di fosforilazione ossidativa (OXPHOS) e alla funzione della catena respiratoria, influenzando il metabolismo energetico cellulare e le risposte allo stress mitocondriale. Alterazioni di SLIRP possono perturbare i programmi di espressione genica mitocondriale e sono state collegate a fenotipi di disfunzione mitocondriale rilevanti per i meccanismi di malattie neuromuscolari e metaboliche. SLIRP è quindi oggetto di studio in vie che collegano la regolazione dell’RNA mitocondriale, la proteostasi e l’adattamento bioenergetico.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO SLIRP (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene SLIRP in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del SLIRP insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto SLIRP a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina SLIRP.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di SLIRP per lo studio della segnalazione di SLIRP, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni SLIRP critici per la funzione di SLIRP
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di SLIRP per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal SLIRP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal SLIRP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus SLIRP. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal SLIRP Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR SLIRP (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia SLIRP per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio SLIRP definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.