Slfn13 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-414596-ACT

SLFN13 umano (Schlafen family member 13) codifica per Slfn13, una proteina stimolata dall’interferone implicata nella regolazione dell’immunità innata e nelle risposte allo stress cellulare. Le proteine della famiglia Schlafen sono comunemente associate al controllo della progressione del ciclo cellulare, della differenziazione e dei programmi antivirali a valle della segnalazione dell’interferone di tipo I, modulando gli stati trascrizionali e traduzionali durante l’attivazione immunitaria. L’espressione di SLFN13 è stata collegata a contesti infiammatori e alle interazioni tra tumore e sistema immunitario, rendendola rilevante per studiare come le vie guidate dall’interferone rimodellino le reti di espressione genica in tipi cellulari pertinenti alla malattia. Queste funzioni collocano Slfn13 come un nodo utile per indagare i circuiti della risposta all’interferone, i meccanismi di evasione immunitaria e la regolazione della crescita dipendente dal contesto.

Slfn13 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SLFN13 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Slfn13 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SLFN13 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SLFN13, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Slfn13. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SLFN13 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Slfn13 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Slfn13 nelle cellule tumorali con espressione di SLFN13 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.