SLC35F2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-406765-ACT

SLC35F2 (solute carrier family 35 member F2) è un trasportatore umano di membrana multipasso coinvolto nell’assorbimento cellulare e nella gestione intracellulare di piccole molecole, con ruoli riportati nel traffico di membrana e nei processi di trasporto di xenobiotici. In quanto membro della famiglia SLC35, viene studiato nel contesto della biologia dei trasportatori, della sensibilità cellulare a specifici composti e dei determinanti dell’esposizione intracellulare che influenzano le vie di risposta allo stress e di sopravvivenza. Un’alterata espressione di SLC35F2 è stata associata a fenotipi correlati al cancro in dataset trascrittomici ed è spesso valutata come modulatore funzionale della risposta ai farmaci e della vulnerabilità metabolica in modelli di cellule tumorali. Queste caratteristiche rendono SLC35F2 un bersaglio utile per studi meccanicistici sulla segnalazione legata al trasporto, sulla fitness cellulare e sul rimodellamento delle vie di segnalazione in condizioni di perturbazione chimica o genetica.

SLC35F2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SLC35F2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

SLC35F2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SLC35F2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SLC35F2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di SLC35F2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SLC35F2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da SLC35F2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via SLC35F2 nelle cellule tumorali con espressione di SLC35F2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.