SIRT1 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-430046-ACT

Il gene murino **Sirt1** codifica **SIRT1**, una deacetilasi proteica **NAD⁺-dipendente** che mette in relazione lo stato energetico cellulare con la regolazione trascrizionale e della cromatina. SIRT1 modula le risposte allo stress, la biogenesi mitocondriale e il metabolismo deacetilando regolatori chiave quali **PGC-1α**, i fattori **FOXO**, **NF-κB** e **p53**, influenzando così il controllo dello stress ossidativo, l’infiammazione e i programmi di sopravvivenza cellulare. Attraverso queste attività, SIRT1 integra vie di rilevamento dei nutrienti e meccanismi di controllo epigenetico che plasmano la differenziazione e la fisiologia dell’organismo. Una segnalazione di SIRT1 deregolata è stata implicata in diversi modelli di disfunzione metabolica, neurodegenerazione, infiammazione e fenotipi associati al cancro, rendendola un nodo ampiamente utilizzato per studi meccanicistici della regolazione genica.

SIRT1 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Sirt1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

SIRT1 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Sirt1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Sirt1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di SIRT1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Sirt1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da SIRT1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via SIRT1 nelle cellule tumorali con espressione di Sirt1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.