SEMA6A Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422887

Panoramica

Sema6a codifica il segnale di guida transmembrana SEMA6A, una semaforina di classe 6 che contribuisce all’assemblaggio dei circuiti neurali regolando il comportamento del cono di crescita, l’instradamento degli assoni e la migrazione neuronale. Attraverso interazioni con i recettori plexin e la segnalazione a valle mediata dalle GTPasi della famiglia Rho, SEMA6A influenza la dinamica del citoscheletro, l’adesione cellulare e la repulsione mediata dal contatto durante lo sviluppo. In modelli murini, alterazioni della funzione di Sema6a sono state associate a difetti della connettività talamocorticale e corticospinale e a fenotipi neuroevolutivi più ampi, a supporto della sua rilevanza per i meccanismi alla base dei disturbi del cablaggio neurale. La segnalazione dipendente da SEMA6A è inoltre studiata in contesti in cui le vie delle semaforine modulano la motilità cellulare e il patterning dei tessuti.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO SEMA6A (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Sema6a in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Sema6a insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Sema6a a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina SEMA6A.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Sema6a per lo studio della segnalazione di SEMA6A, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Sema6a critici per la funzione di SEMA6A
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Sema6a per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal SEMA6A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal SEMA6A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Sema6a. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal SEMA6A Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR SEMA6A (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Sema6a per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Sema6a definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.