SELENBP1 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-422870-ACT

Il gene murino **Selenbp1** codifica la **selenium-binding protein 1 (SELENBP1)**, una proteina citosolica conservata implicata nella gestione cellulare del selenio e nell’omeostasi redox. L’espressione di SELENBP1 è spesso associata allo stato metabolico e alla differenziazione, con collegamenti riportati alle risposte allo stress ossidativo, alla funzione mitocondriale e alla regolazione di specie reattive di zolfo/selenio. Livelli alterati di SELENBP1 sono stati associati a cambiamenti nella proliferazione cellulare e nell’invasività in ambito oncologico, e sono stati studiati anche in contesti di infiammazione e danno tissutale, in cui l’equilibrio redox risulta perturbato. In quanto marcatore dello stato metabolico e ossidativo della cellula, SELENBP1 è utile per analizzare le vie che collegano la biologia del selenio ai programmi trascrizionali e ai fenotipi di adattamento allo stress.

SELENBP1 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Selenbp1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

SELENBP1 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Selenbp1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Selenbp1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di SELENBP1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Selenbp1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da SELENBP1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via SELENBP1 nelle cellule tumorali con espressione di Selenbp1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.