SDHC Plasmide Double Nickase (h): sc-405559-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- SDHC Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il SDHC Double Nickase Plasmid (h) e il SDHC Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira SDHC. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: SDHC Antibody (C-2): sc-515102
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
SDHC Plasmide Double Nickase (h) | sc-405559-NIC | 20 µg | $410.00 |
SDHC codifica la subunità C del complesso della succinato deidrogenasi ancorata alla membrana, un componente essenziale del complesso mitocondriale II che collega il ciclo degli acidi tricarbossilici (TCA) alla catena di trasporto degli elettroni, sostenendo l’ossidazione del succinato e il trasferimento di elettroni all’ubichinone. Come parte dell’ancoraggio alla membrana interna del mitocondrio, SDHC contribuisce a stabilizzare l’assemblaggio del complesso II e consente una fosforilazione ossidativa efficiente, influenzando l’equilibrio redox cellulare e la gestione delle specie reattive dell’ossigeno. L’alterazione di SDHC può compromettere la respirazione mitocondriale e favorire l’accumulo di succinato, con effetti a valle sulla segnalazione metabolica e sulla regolazione epigenetica attraverso una modificata attività delle diossigenasi dipendenti dall’α-chetoglutarato. Le alterazioni di SDHC sono associate a disfunzione mitocondriale e sono state implicate nella biologia dei paragangliomi/feocromocitomi ereditari, rendendolo un bersaglio rilevante per studiare la riprogrammazione metabolica e le vie di risposta allo stress.
SDHC Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus SDHC nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di SDHC. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di SDHC. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con SDHC interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.