SCD1 Plasmide Double Nickase (m): sc-422809-NIC

Il gene murino **Scd1** codifica la **stearoil‑CoA desaturasi 1 (SCD1)**, un enzima localizzato nel reticolo endoplasmatico che introduce un doppio legame *cis* negli acil‑CoA di acidi grassi saturi, generando acidi grassi monoinsaturi come il palmitoleato e l’oleato. Controllando l’equilibrio tra lipidi saturi e monoinsaturi, SCD1 regola la lipogenesi *de novo*, la composizione dei fosfolipidi di membrana, la sintesi di trigliceridi ed esteri del colesterolo e la biogenesi delle goccioline lipidiche, con effetti a valle sulle risposte allo stress del RE e sulla segnalazione metabolica. L’attività di Scd1 si interseca con programmi trascrizionali di sensing dei nutrienti, inclusi i pathway di SREBP1 e PPAR, plasmando l’accumulo energetico cellulare e l’omeostasi redox. Alterazioni dell’espressione o dell’attività di SCD1 sono state associate a fenotipi metabolici che coinvolgono steatosi epatica e disregolazione correlata all’obesità, e SCD1 è spesso studiata in contesti di rimodellamento lipidico in stati proliferativi e infiammatori.

SCD1 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Scd1 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Scd1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Scd1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Scd1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.