SCAP Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401474-ACT

A SCAP (chaperona de SREBF) humana é uma proteína de membrana do retículo endoplasmático que atua como sensor de esteróis e fator escolta para os fatores de transcrição SREBP, permitindo o tráfego regulado até o complexo de Golgi para ativação proteolítica. Por meio desse eixo SCAP–SREBP, a SCAP controla programas transcricionais que governam a biossíntese de colesterol e de ácidos graxos, a homeostase de lipídios de membrana e respostas adaptativas à disponibilidade de nutrientes e de esteróis. A atividade da SCAP interage com a retenção mediada por INSIG, o transporte do RE para o Golgi e a regulação por feedback da expressão de genes lipogênicos. A desregulação da sinalização dependente de SCAP tem sido associada a alterações no metabolismo lipídico observadas em doenças metabólicas e à reprogramação lipídica que sustenta o crescimento e a adaptação ao estresse em diversos contextos de câncer.

SCAP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SCAP sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SCAP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SCAP em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SCAP, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SCAP. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SCAP nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SCAP no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SCAP em células tumorais com expressão de SCAP silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.