SC Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402459-ACT

O receptor de imunoglobulina polimérica (PIGR) codifica o componente secretor (SC), um receptor transmembranar que se liga à IgA dimérica e à IgM pentamérica na superfície basolateral das células epiteliais e as transporta através do epitélio para secreção mucosa. Durante a transcitose, o SC é liberado por proteólise e permanece associado à IgA secretora, aumentando a exclusão imune e protegendo os anticorpos da proteólise em ambientes mucosos. A expressão de PIGR é regulada por sinalização inflamatória e mediada por citocinas, incluindo as vias NF-κB e JAK/STAT, conectando as respostas inatas do epitélio à imunidade adaptativa mucosa. A biologia desregulada de PIGR/SC é estudada em disfunção de barreira e inflamação crônica, com implicações para a suscetibilidade a infecções e para interações no microambiente tumoral epitelial.

SC O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PIGR sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SC O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PIGR em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PIGR, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SC. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PIGR nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SC no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SC em células tumorais com expressão de PIGR silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.