RNF186 Plasmide Double Nickase (h): sc-408416-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- RNF186 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il RNF186 Double Nickase Plasmid (h) e il RNF186 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira RNF186. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
RNF186 Plasmide Double Nickase (h) | sc-408416-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
RNF186 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-408416-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
RNF186 codifica una ligasi E3 dell’ubiquitina di tipo RING localizzata nel reticolo endoplasmatico, che contribuisce a regolare il controllo qualità delle proteine e la segnalazione catalizzando il trasferimento di ubiquitina su specifici substrati. Attraverso il turnover dipendente dall’ubiquitina e la modulazione dello stress del RE e della segnalazione infiammatoria, RNF186 può influenzare l’omeostasi epiteliale, i processi legati alla barriera e vie immunoresponsive come le reti collegate a NF-κB. Studi genetici e funzionali hanno associato variazioni di RNF186 e alterazioni della sua espressione alla suscettibilità a fenotipi infiammatori, in particolare in contesti gastrointestinali, a sostegno della sua rilevanza nello studio dei meccanismi che collegano la proteostasi alla regolazione immunitaria mucosale. In quanto nodo della regolazione mediata dall’ubiquitina, RNF186 viene spesso esaminato per il suo impatto sulla stabilità dei substrati, sulle risposte allo stress e sui programmi trascrizionali a valle in modelli cellulari umani.
RNF186 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus RNF186 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di RNF186. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di RNF186. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con RNF186 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.