RNF148 Plasmide Double Nickase (m): sc-427917-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- RNF148 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il RNF148 Double Nickase Plasmid (m) e il RNF148 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Rnf148. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
RNF148 Plasmide Double Nickase (m) | sc-427917-NIC | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino Rnf148 codifica RNF148, una ligasi E3 dell’ubiquitina contenente un dominio RING finger, implicata nel turnover proteico dipendente dall’ubiquitina e nella regolazione dell’omeostasi proteica cellulare. Nell’ambito del sistema ubiquitina–proteasoma, RNF148 dovrebbe influenzare la stabilità di componenti di vie che controllano la dinamica della segnalazione, le risposte allo stress e i processi associati al ciclo cellulare. La disregolazione dell’attività delle ligasi E3 può perturbare la proteostasi e i programmi trascrizionali a valle, fornendo un collegamento meccanicistico a fenotipi rilevanti per la biologia dello sviluppo e la modellistica di malattie nei sistemi mammiferi. Lo studio di RNF148 supporta l’indagine della regolazione guidata dall’ubiquitinazione e l’identificazione di substrati che modellano le transizioni dello stato cellulare.
RNF148 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Rnf148 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Rnf148. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Rnf148. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Rnf148 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.