RIP Plasmide Double Nickase (h): sc-400377-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- RIP Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il RIP Double Nickase Plasmid (h) e il RIP Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira RIPK1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: RIP Antibody (C-12): sc-133102
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
RIP Plasmide Double Nickase (h) | sc-400377-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
RIP Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400377-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
RIPK1 umano (RIP) è una chinasi serina/treonina che integra i segnali provenienti dal recettore del TNF e dalle vie di riconoscimento dei pattern per coordinare la segnalazione infiammatoria e le decisioni di morte cellulare programmata. Attraverso l’assemblaggio di complessi associati al recettore, RIPK1 regola l’attivazione di NF-κB e MAPK, nonché l’apoptosi e la necroptosi tramite il crosstalk con la segnalazione FADD–caspasi-8 e RIPK3–MLKL. Le sue funzioni dipendenti dall’attività chinasica e quelle di scaffold modellano la produzione di citochine, le risposte immunitarie innate e l’adattamento allo stress cellulare. Un’attività deregolata di RIPK1 è stata implicata nei meccanismi di malattie infiammatorie e neurodegenerative e nella biologia del microambiente tumorale, rendendola un bersaglio frequente per studi meccanicistici sul controllo del destino cellulare.
RIP Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus RIPK1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di RIPK1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di RIPK1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con RIPK1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.