Ribosomal Protein LP0 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419183

Panoramica

Rplp0 codifica la proteina ribosomiale LP0 (P0), un componente centrale della grande subunità ribosomiale 60S che, insieme alle proteine P1/P2, forma lo “stelo” ribosomiale e supporta il reclutamento dei fattori di traduzione e l’attivazione delle GTPasi durante la fase di elongazione. In quanto proteina ribosomiale “housekeeping” conservata, LP0 è essenziale per la biogenesi dei ribosomi, la sintesi proteica globale e i programmi di crescita cellulare e di adattamento allo stress legati alla funzione nucleolare. L’alterazione delle proteine ribosomiali può compromettere il controllo della traduzione e la proteostasi, contribuendo a fenotipi simili alle ribosomopatie e a modifiche di proliferazione, apoptosi e differenziamento in contesti rilevanti per la malattia. Nei sistemi murini, Rplp0 è inoltre ampiamente usato come gene di riferimento, rendendo la sua perturbazione mirata informativa per valutare strategie di normalizzazione e fenotipi dipendenti dalla traduzione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Ribosomal Protein LP0 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Rplp0 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Rplp0 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Rplp0 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Ribosomal Protein LP0.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Rplp0 per lo studio della segnalazione di Ribosomal Protein LP0, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Rplp0 critici per la funzione di Ribosomal Protein LP0
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Rplp0 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Ribosomal Protein LP0 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Ribosomal Protein LP0 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Rplp0. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Ribosomal Protein LP0 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Ribosomal Protein LP0 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Rplp0 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Rplp0 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.