Rfp2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-403870

Panoramica

TRIM13 codifica la ligasi E3 dell’ubiquitina umana con dominio RING Rfp2, una proteina prevalentemente associata al reticolo endoplasmatico, implicata nella proteostasi dipendente dall’ubiquitina e nel controllo qualità del RE. Rfp2 contribuisce alla regolazione del turnover proteico e della segnalazione responsiva allo stress promuovendo l’ubiquitinazione dei substrati, collegandosi a processi quali la degradazione associata al RE, la regolazione dell’apoptosi e la modulazione delle vie dell’immunità innata. Alterazioni dell’espressione o dell’attività di TRIM13 sono state studiate in contesti di adattamento cellulare allo stress e di segnalazione dell’ubiquitina deregolata, che può contribuire a fenotipi oncogeni e a proteinopatie neurodegenerative. In quanto membro della famiglia TRIM, Rfp2 rappresenta un nodo analiticamente accessibile per dissezionare l’architettura delle vie dell’ubiquitina e la segnalazione localizzata agli organelli nelle cellule umane.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Rfp2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene TRIM13 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del TRIM13 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto TRIM13 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Rfp2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di TRIM13 per lo studio della segnalazione di Rfp2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni TRIM13 critici per la funzione di Rfp2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di TRIM13 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Rfp2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Rfp2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus TRIM13. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Rfp2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Rfp2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia TRIM13 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio TRIM13 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.