REEP2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-432536

Panoramica

Reep2 codifica la receptor expression-enhancing protein 2 (REEP2), un membro della famiglia REEP implicato nel modellare le membrane del reticolo endoplasmatico e nel supportare le interazioni tra RE e microtubuli che influenzano il traffico intracellulare. REEP2 contribuisce alla gestione delle proteine di membrana e all’organizzazione del RE associata ai neuriti, processi importanti per mantenere la morfologia neuronale e la proteostasi. L’alterazione delle funzioni della famiglia REEP è stata collegata a vulnerabilità assonale e a meccanismi neurodegenerativi, rendendo Reep2 un bersaglio rilevante per lo studio delle vie che influenzano il mantenimento degli assoni e le risposte allo stress. Nei sistemi murini, la perturbazione di Reep2 può essere utilizzata per indagare il rimodellamento del RE, la dinamica degli organelli e la segnalazione dipendente dal traffico nei neuroni e in altri tipi cellulari secretori.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO REEP2 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Reep2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Reep2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Reep2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina REEP2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Reep2 per lo studio della segnalazione di REEP2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Reep2 critici per la funzione di REEP2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Reep2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal REEP2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal REEP2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Reep2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal REEP2 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR REEP2 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Reep2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Reep2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.