Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
RecQL4 Plasmide Double Nickase (m): sc-429775-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- RecQL4 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il RecQL4 Double Nickase Plasmid (m) e il RecQL4 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Recql4. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: RecQL4 Antibody (B-3): sc-518189
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
RecQL4 Plasmide Double Nickase (m) | sc-429775-NIC | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino Recql4 codifica l’elicasi RecQL4, un membro della famiglia RecQ che contribuisce al mantenimento del genoma durante la replicazione e la riparazione del DNA. RecQL4 partecipa all’attivazione delle origini di replicazione e alla resezione delle estremità del DNA e contribuisce a vie che includono la ricombinazione omologa, l’unione di estremità non omologhe e la riparazione per escissione di basi, limitando lo stress replicativo e l’instabilità cromosomica. La perdita o la disfunzione di RECQL4 è associata a sindromi ereditarie di instabilità genomica e a fenotipi di predisposizione al cancro, rendendolo un nodo utile per studiare la segnalazione del danno al DNA, il controllo dei checkpoint e la riparazione delle rotture associate alla replicazione. La perturbazione di Recql4 è comunemente utilizzata per analizzare come il riavvio della forcella guidato dalle elicasi e la scelta della via di riparazione influenzino il destino cellulare sotto stress genotossico.
RecQL4 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Recql4 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Recql4. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Recql4. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Recql4 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.