RBM25 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-407825-ACT

L’RBM25 umano codifica un regolatore dello splicing legante l’RNA che si associa allo spliceosoma per influenzare la processazione alternativa del pre‑mRNA, la selezione degli esoni e la maturazione dell’mRNA. Controllando l’equilibrio tra isoforme trascrittomiche, RBM25 contribuisce al controllo qualità dell’RNA e a programmi a valle che influenzano la progressione del ciclo cellulare, le risposte al danno del DNA e l’espressione genica adattativa allo stress. Un’attività di RBM25 deregolata è stata collegata a pattern di splicing aberranti e a un’espressione alterata di trascritti legati all’apoptosi e alla segnalazione, osservati in diversi contesti rilevanti per la patologia, inclusa la biologia del cancro. In quanto fattore di splicing con un impatto ampio sul trascrittoma, RBM25 viene spesso studiato per mappare reti regolatorie che collegano la processazione dell’RNA agli esiti fenotipici.

RBM25 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di RBM25 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

RBM25 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus RBM25 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione RBM25, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di RBM25. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus RBM25 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da RBM25 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via RBM25 nelle cellule tumorali con espressione di RBM25 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.