RBM10 Plasmide Double Nickase (h): sc-418527-NIC

RBM10 (RNA binding motif protein 10) è un fattore legante l’RNA prevalentemente nucleare che regola lo splicing del pre‑mRNA, la selezione alternativa degli esoni e il processamento dell’RNA attraverso interazioni con componenti dello spliceosoma e motivi di RNA specifici di sequenza. Modulando la produzione di isoforme trascrittomiche, RBM10 influenza programmi di espressione genica legati al controllo del ciclo cellulare, all’apoptosi e alla differenziazione, ed è stato implicato in reti rilevanti per la segnalazione, come le decisioni di splicing associate alla via Notch. Un’attività o un’espressione deregolata di RBM10 è associata a paesaggi di splicing alterati osservati in molteplici contesti tumorali, in cui lo switching di isoforme può influenzare la proliferazione e le vie di risposta allo stress. Queste proprietà rendono RBM10 un bersaglio utile per studi meccanicistici sulla regolazione dello splicing e sul rimodellamento del trascrittoma nelle cellule umane.

RBM10 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus RBM10 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di RBM10. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di RBM10. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con RBM10 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.