RB1CC1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-416259-ACT

RB1CC1 umano (noto anche come FIP200) è un componente centrale del complesso di inizio dell’autofagia ULK1 e coordina le fasi precoci della formazione dell’autofagosoma in risposta a segnali nutrizionali ed energetici. Attraverso interazioni con ULK1/2, ATG13 e ATG101, RB1CC1 collega la segnalazione regolata da AMPK e mTOR al flusso autofagico, contribuendo al contempo all’organizzazione del citoscheletro e alla gestione selettiva dei carichi. L’autofagia dipendente da RB1CC1 influenza il controllo qualità mitocondriale, la proteostasi e l’adattamento allo stress cellulare. La deregolazione delle vie associate a RB1CC1 è stata implicata in contesti rilevanti per la biologia tumorale e la neurobiologia, supportandone l’uso come nodo meccanicistico per studiare il controllo della crescita, le risposte allo stress e il crosstalk tra vie di segnalazione.

RB1CC1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di RB1CC1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

RB1CC1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus RB1CC1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione RB1CC1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di RB1CC1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus RB1CC1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da RB1CC1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via RB1CC1 nelle cellule tumorali con espressione di RB1CC1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.