RASL11A Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-409106-LAC

RASL11A codifica una piccola proteina legante il GTP, simile a Ras, appartenente alla superfamiglia RAS, che si ritiene moduli la trasduzione del segnale accoppiando il ciclo dei nucleotidi guaninici alla dinamica delle vie di segnalazione a valle. Influenzando gli interruttori molecolari correlati a Ras, RASL11A è implicata in processi quali il controllo della proliferazione, l’organizzazione del citoscheletro e il traffico associato alle vescicole, che determinano lo stato cellulare e la risposta allo stress. Pattern di espressione alterati di RASL11A sono stati riportati in molteplici contesti di cancro e di rimodellamento tissutale, a supporto del suo impiego come nodo meccanicistico per studiare la riprogrammazione della segnalazione oncogenica e i fenotipi associati alla differenziazione. Indagare la regolazione di RASL11A può quindi chiarire come le reti della famiglia Ras integrino segnali che influenzano il controllo della crescita e la plasticità cellulare.

Le particelle di attivazione lentivirale RASL11A (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di RASL11A in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale RASL11A (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione RASL11A, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di RASL11A. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo RASL11A e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.