Rac 1 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-400175-LAC

O RAC1 codifica a pequena GTPase Rac1, um interruptor molecular da família Rho que coordena a remodelação do citoesqueleto de actina, a formação de rufos de membrana e a polaridade celular ao alternar entre os estados ligados a GDP e a GTP. Por meio de efetores a jusante como as PAKs e o complexo WAVE/Arp2/3, Rac1 regula a dinâmica de adesão, o tráfego de vesículas e a migração celular direcionada, além de interagir com a sinalização de PI3K e a produção de EROs (espécies reativas de oxigênio) dependente da NADPH oxidase. A atividade de RAC1 influencia proliferação, sobrevivência e programas transcricionais, integrando sinais de receptores de fatores de crescimento e de integrinas. A desregulação da sinalização de RAC1 tem sido implicada em diversos processos relevantes para doenças, incluindo fenótipos invasivos, motilidade alterada de células imunes e sinalização inflamatória aberrante, tornando-o um alvo frequente em estudos mecanísticos de biologia celular e de vias de sinalização.

As Partículas de Ativação Lentivirais Rac 1 (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de RAC1 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais Rac 1 (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição RAC1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de Rac 1. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo RAC1 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.