Rac 1 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-400175-LAC

RAC1 codifica la piccola GTPasi Rac1, un interruttore molecolare della famiglia Rho che coordina il rimodellamento del citoscheletro di actina, la formazione di ruffle di membrana e la polarità cellulare passando ciclicamente tra gli stati legati a GDP e a GTP. Attraverso effettori a valle quali le PAK e il complesso WAVE/Arp2/3, Rac1 regola la dinamica dell’adesione, il traffico vescicolare e la migrazione cellulare direzionata, e interagisce con la segnalazione PI3K e con la produzione di ROS dipendente dalla NADPH ossidasi. L’attività di RAC1 influenza proliferazione, sopravvivenza e programmi trascrizionali, integrando segnali provenienti dai recettori per i fattori di crescita e dalle integrine. Una segnalazione di RAC1 deregolata è stata implicata in molteplici processi rilevanti per la malattia, inclusi fenotipi invasivi, alterata motilità delle cellule immunitarie e segnalazione infiammatoria aberrante, rendendola un bersaglio frequente in studi meccanicistici di biologia cellulare e delle vie di segnalazione.

Le particelle di attivazione lentivirale Rac 1 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di RAC1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Rac 1 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione RAC1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di Rac 1. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo RAC1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.