Rab11-FIP3 Plasmide Double Nickase (h): sc-405735-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Rab11-FIP3 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Rab11-FIP3 Double Nickase Plasmid (h) e il Rab11-FIP3 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira RAB11FIP3. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Rab11-FIP3 Antibody (6H6): sc-517043
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Rab11-FIP3 Plasmide Double Nickase (h) | sc-405735-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Rab11-FIP3 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-405735-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
RAB11FIP3 codifica Rab11-FIP3, un effettore di Rab11 che collega gli endosomi di riciclo Rab11-positivi ai macchinari di rimodellamento del citoscheletro e della membrana. Coordina il riciclo endocitico, l’ancoraggio delle vescicole e l’abscissione durante la citocinesi, sostenendo la corretta organizzazione del midbody e il completamento della divisione cellulare. Attraverso questi ruoli contribuisce al controllo spaziale del traffico di membrana, influenzando il turnover dei recettori e le dinamiche di segnalazione. La disregolazione del traffico legato a Rab11-FIP3 e dei processi citocinetici è stata associata a fenotipi proliferativi e migratori rilevanti per la biologia delle cellule tumorali e per altri disturbi che coinvolgono un trasporto di membrana aberrante.
Rab11-FIP3 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus RAB11FIP3 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di RAB11FIP3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di RAB11FIP3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con RAB11FIP3 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.